基因型：

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1recA1 hsdR17(rk- ,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA

簡要說明：

DH5α λpir 菌株來源于 DH5α，在 DH5α 大腸桿菌基因組中引入 LAMpir，即為 DH5α λpir，該菌株可以表達PIR 蛋白，使得含有 R6Kg ori 復制子的質?？梢栽谄渲姓椭?。 DH5α λpir 菌株缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒 DNA 的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩定性； lacZΔM15 的存在使 DH5α 可用于藍、白斑篩選；但 DH5α λpir 菌株生長速度較慢，在平板培養或液體搖菌時應 延長生長時間。 DH5αλpir 感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>1×109 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.DH5α λpir 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質?；蜻B接產物）并 用手打 EP 管底混勻，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌LB培養基，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 70 分鐘。

4. 5000 rpm 離心 1 分鐘收集菌體，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 LB 培養基上。5. 將平板倒置放于 37℃培養箱至少 18 小時。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降 低轉化效率

2. DH5α λpir 菌株生長緩慢，在平板上培養或液體搖菌時應延長菌體生長時間（37℃，18 小時以上）。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。